ABSTRACT
The objective of this study was to design and evaluate new primers for species-specific detection of L. infantum chagasi using PCR. Two combinations of primer pairs were established with the aim of obtaining specific amplification products from the L. infantum chagasi 18S rRNA gene. The combinations of the primer pairs and the respective sizes of the PCR products, based on the U422465 GenBank reference sequence of L. infantum chagasi, were: LCS1/LCS3 (259 bp) and LCS2/LCS3 (820 bp). It was concluded that the new PCR assays optimized using the primer pairs LCS1/LCS3 and LCS2/LCS3 were effective for specific detection of L. infantum chagasi, with analytical sensitivity to detect 1 pg/µL of DNA.
Objetivou-se com este trabalho construir e avaliar novos primers para a detecção espécie-específicos de L. infantum chagasi por PCR. Foram estabelecidas duas combinações de pares de primers com a finalidade de obter produtos de amplificação específicos para o gene 18S rRNA de L. infantum chagasi. As combinações dos pares de primers e os respectivos tamanhos dos produtos de PCR, previstos conforme a sequência de referência utilizada (GenBank U422465) foram: LCS1/LCS3 (259 pb); LCS2/LCS3 (820 pb). Pôde-se concluir que os novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de primers LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção específica de L. infantum chagasi, com sensibilidade analítica para detectar 1 pg/µL de DNA.
Subject(s)
Leishmania infantum/genetics , Leishmaniasis, Visceral/diagnosis , DNA Primers , Polymerase Chain ReactionABSTRACT
A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose causada por Leishmania infantum chagasi. Canídeos desempenham importante papel epidemiológico por atuarem como reservatórios naturais. Este trabalho teve como objetivo conduzir uma investigação sobre leishmaniose visceral canina (LVC) em cães na cidade de Goiânia-GO. Para o estudo, foram utilizados 214 animais sintomáticos e assintomáticos e colhidas amostras de sangue, biópsias de pele e aspirados de linfonodo. Nos testes sorológicos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), 20 animais apresentaram resultados positivos. No exame parasitológico direto, foram detectadas amastigotas em seis amostras. Os testes pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizados apenas nos animais sintomáticos ou com resultado positivo em pelo menos um dos exames anteriores (n igual 81), foram positivos para sete cães. As amostras positivas no exame parasitológico foram também submetidas à PCR. Das 20 amostraspositivas nos testes pela RIFI, apenas sete foram confirmadas pela PCR. Os resultados positivos pela PCR espécie-específica, nas sete amostras, confirmaram a identidade molecular de L. i. chagasi nestes animais. Os resultados registraram os primeiros casos autóctones em Caldas Novas-GO e Novo Brasil-GO e evidenciaram a necessidade urgente de intensificação das estratégias de controle da LVC nestes municípios. O estudo revelou a existência de casos de LVC em cães que buscam atendimento clínico na cidade de Goiânia.